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小鼠小肠各段肠上皮内淋巴细胞γδT、vγ1、vγ4、IFNγ和IL-17的流式检测

杨加彩, 宋亚军, 黄赤兵

第三军医大学新桥医院

[摘要]目的 流式细胞术检测 C57/b6小鼠小肠各肠段上皮内淋巴细胞中γδT及其亚型vγ1和vγ4的比例,以及IFNγ、IL-17的阳性率。方法 实验采用8周龄左右的清洁级雌性C57/6小鼠,根据生理解剖结构把小肠分为十二指肠、空肠、回肠三段,分别提取获得上皮内淋巴细胞。一部分细胞直接加入流式抗体Anti mouse CD3e FITC、Anti mouse γδTCR-PE、Anti mouse vγ1-FITC、Anti mouse vγ4-FITC。孵育后流式仪上机检测阳性率;另一部分细胞用含有10%FBS的RPMI1460培养基重悬后加cellstimulation cocktail(500X),5X105/孔加入到48孔细胞板中常规培养16小时。收集细胞分别加入流式抗体Anti mouseγδTCR、Anti mouse IFNγ、Anti mouseIL-17孵育后流式仪检测阳性率。结果 十二指肠、控场、回肠上皮内淋巴细胞中γδ阳性细胞比例分别为38.22%、20.24%、11.43%,三者之间在统计学上具有显著性差异(P<0.001);十二指肠、控场、回肠上皮内淋巴细胞中vγ1阳性细胞比例分别为12.63%、9.17%、5.86%,三者之间在统计学上具有显著性差异(P<0.001);十二指肠、控场、回肠上皮内淋巴细胞中vγ4阳性细胞比例分别为3.495%、2.96%、2.61%,十二指肠上皮内淋巴细胞中vγ4阳性细胞显著性高于回肠的比例(p<0.05);十二指肠、控场、回肠上皮内淋巴细胞中IFNγ阳性细胞比例分别为31.95%、4.83%、0.48%,三者之间在统计学上具有显著性差异(P<0.001);十二指肠、控场、回肠上皮内淋巴细胞中IL-17阳性细胞比例分别为37.89%、3.06%、0.704%,三者之间在统计学上具有显著性差异(P<0.001)。

结论 小鼠肠上皮内淋巴细胞的γδT、vγ1、vγ4、以及IFNγ、IL-17的阳性率在十二指肠、空肠、回肠各肠段不同,并且呈依次降低的趋势。

[关键词] 十二指肠、空肠、回肠、γδ T细胞因子